Святитель Митрофан родился в ноябре 1623 года на Владимирщине, в семье потомственного священника. 2 апреля 1682 года он был рукоположен во епископа Воронежского; тогда здесь только что была учреждена епархия, она требовала благоустроения, заботливости и твердого, самоотверженного управления. Признавая важность просвещения, Владыка Митрофан открыл школы, заменил старые книги на новые (это был сильный удар по старообрядчеству). За время 20-летнего епископства святителя Митрофана количество храмов в епархии возросло на четверть.
Внутренняя жизнь Митрофана была скрыта от постороннего взора. С внешней стороны он был крайне прост. Живя летом на архиерейской даче, любил трудиться в поле и никогда не оставался без дела. Отдавал свои деньги на помощь сиротам, вдовам, больным, бездомным, заключенным. На собственные средства погребал бедняков, вписывая их имена в соборный синодик и поминая в молитве.
В то время молодой царь Петр I завел в Воронеже верфи для постройки флота. Большая дружба сложилась у него с епископом Митрофаном. Святитель объяснял в проповедях пастве необходимость царевых реформ, помогал Петру неоднократно, заботился о трудящихся на верфях.
Государь Петр I почитал Митрофана как своего духовного наставника. Когда у царя возникла мысль основать новую столицу на севере России, он обратился к святителю Митрофану и тот прозорливо благословил начинание Петра.
В последний раз Петр I и святитель Митрофан увиделись 2 февраля 1702 года, когда святитель тяжело заболел. 2 августа 1703 года он принял схиму с именем Макарий, а 23 ноября (по ст.ст.) 1703 года, причастившись Святых Христовых Тайн, скончался. Узнав о том, что святитель умирает, Петр I ускорил свой приезд в Воронеж. Прибыл он в самый день кончины Митрофана и застал его отходящим ко Господу. "Царь припал к его одру, лобызал его десницу и оставался при нем неотлучно до самого последнего вдоха". Царь сам нес его гроб до могилы, а потом сказал окружающим: "Не осталось у меня более такого святого старца!.."
Со дня кончины святителя Митрофана не прекращалось его народное почитание. В 1831 году было обретено нетленное тело Владыки, и состоялось прославление в лике святых. Святые мощи, от которых происходили чудеса исцеления, упокоились в Благовещенском храме, построенном святителем. Вторично обретенные в 1989 году, они были помещены в Покровском соборе Воронежа.
Сейчас крестные ходы с этими святыми мощами, по благословению митрополита Воронежского и Борисоглебского Сергия, совершаются по всем православным приходам епархии.